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談談葉綠素的提取和分離方法

時間:2023-02-21 14:00:02   訪客:2214

提取:

葉綠素提取的準備工作在室溫為 25°C 的半暗室中進行。提取步驟如下:
(1)取1000克新鮮綠葉,放入韋伯斯特攪拌機中粉碎。
(2)將1000克壓碎的綠葉提取到加入少量碳酸鈣的丙酮(溫度20℃)中,直至過濾和洗滌的葉碎片無色。
(3) 將過濾后的丙酮提取液放入盛有1L石油醚和100mL丙酮的漏斗中,加入蒸餾水輕輕搖動直至分層。棄去水層中的大部分丙酮和水溶性雜質(zhì),只剩下石油醚溶液。
(4)石油醚溶液再次用蒸餾水純化后,用含石油醚和0.01g草酸的200mL 80%甲醇溶液洗滌5次以上,最后得到黃綠色懸浮液。
(5)將懸浮液用無水硫酸鈉干燥,浸潤于3cm厚的蔗糖粉制成的柱子中,然后用石油醚洗滌沉淀的色素,除去類胡蘿卜素,使其僅含天然葉綠素。
(6) 含有天然葉綠素的蔗糖柱分為兩層,綠色層有4-10mm的葉綠素b層,另一層藍色層有2-6mm的葉綠素a層。
(7) 將位于藍層中間的部分(約一半藍層)放入乙醚中,過濾懸浮液,洗脫,用蒸餾水洗滌,用硫酸鈉干燥,然后用容器過濾后,葉綠素得到一個。
(8)將(6)中綠色層中間部分去掉,迅速放入乙醚中過濾洗脫,制成葉綠素b乙醚溶液。
分離:
色譜法是分離、純化和鑒定有機化合物,尤其是痕量分析的重要方法。果蔬中的色素主要有脂溶性胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素和水溶性花青素。在提取實驗中,我們可以利用相似混溶原理過濾掉水溶性花青素,然后利用薄層色譜、柱色譜、高效液相色譜分離胡蘿卜素、葉黃素和葉綠素。顏料的極性依次減弱,可適當選擇單一有機溶劑或不同比例的混合溶劑作為展開溶劑和洗脫液,以確定最佳的優(yōu)化分離條件。


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